Plásmido CRISPR de Activación (h) LKB1: sc-400313-ACT

STK11 codifica la quinasa de serina/treonina LKB1, un regulador maestro de la detección del estado energético celular que fosforila y activa AMPK y una familia de quinasas relacionadas con AMPK. A través de estos sustratos, LKB1 coordina la homeostasis metabólica, la polaridad celular, la autofagia y las respuestas al estrés, integrando señales que influyen en la actividad de mTORC1 y en la progresión del ciclo celular. La pérdida o atenuación de la señalización de LKB1 altera la organización epitelial y los puntos de control metabólicos, lo que vincula la disfunción de STK11 con la biología de los supresores tumorales y con un control del crecimiento alterado en múltiples contextos tisulares. En consecuencia, STK11/LKB1 se estudia ampliamente en vías que regulan la adaptación a nutrientes, la función mitocondrial y la señalización dependiente de la polaridad.

LKB1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de STK11 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LKB1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus STK11 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional STK11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LKB1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo STK11 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LKB1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LKB1 en células tumorales con expresión de STK11 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.