LETM1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406163

Übersicht

LETM1 (leucine zipper EF-hand containing transmembrane protein 1) ist ein Protein der inneren Mitochondrienmembran, das an der mitochondrialen Ionenhomöostase und der Kontrolle der Bioenergetik beteiligt ist. Es trägt zur Regulation der mitochondrialen Morphologie, der Organisation der Cristae und der Kopplung von Ionentransport an die oxidative Phosphorylierung bei und verknüpft damit die LETM1-Aktivität mit dem zellulären Energiestoffwechsel und Stressantworten. Eine veränderte LETM1-Gen-Dosierung wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und mitochondrialer Dysfunktion in Verbindung gebracht; zudem wurde eine Fehlregulation im Kontext von Tumorzellstoffwechsel und Proliferation untersucht. Als mitochondrialer Regulator wird LETM1 häufig hinsichtlich seines Einflusses auf die Apoptose-Empfindlichkeit, die Signalgebung reaktiver Sauerstoffspezies (ROS) und die Umgestaltung metabolischer Signalwege erforscht.

Das LETM1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des LETM1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des LETM1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von LETM1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LETM1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von LETM1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LETM1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf LETM1-Exone abzielen, die für die LETM1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere LETM1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LETM1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LETM1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des LETM1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LETM1 HDR-Plasmid (h) und LETM1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von LETM1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten LETM1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.