Plasmide Double Nickase (h) LDLR: sc-400645-NIC

Le récepteur des lipoprotéines de basse densité (LDLR) est un récepteur endocytaire de surface cellulaire qui se lie aux lipoprotéines contenant les apolipoprotéines B et E et médie l’internalisation des particules de LDL dépendante de la clathrine, régulant ainsi l’absorption cellulaire du cholestérol et l’homéostasie lipidique systémique. Après endocytose, le LDLR se dissocie généralement de son ligand dans l’endosome acide puis est recyclé vers la membrane plasmique, reliant le trafic du récepteur à la détection du cholestérol et à la biogenèse membranaire. L’activité du LDLR s’articule avec les programmes transcriptionnels contrôlés par SREBP, l’estérification intracellulaire du cholestérol et la régulation par rétrocontrôle du métabolisme lipidique. Les altérations de l’expression ou de la fonction du LDLR sont largement étudiées dans la biologie des dyslipidémies et les voies liées à l’athérosclérose, ainsi que dans des modèles cellulaires d’absorption des lipoprotéines et de recyclage des récepteurs.

LDLR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LDLR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LDLR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LDLR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LDLR.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.