LDH-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-416429

Übersicht

LDHB kodiert die LDH‑B‑Untereinheit der Laktatdehydrogenase, eines wichtigen zytosolischen Enzyms, das die wechselseitige Umwandlung von Laktat und Pyruvat unter gekoppelt ablaufendem NADH/NAD⁺‑Zyklus katalysiert. Durch die Regulation der Pyruvatverwertung und der Laktat-Clearance hilft LDH‑B, Glykolyse, mitochondriale oxidative Stoffwechselwege und die Redoxhomöostase zu koordinieren und beeinflusst so die Energiegewinnung unter wechselnden Sauerstoff- und Nährstoffbedingungen. Die LDHB‑Aktivität trägt zur metabolischen Umprogrammierung bei zellulärem Stress und während der Differenzierung bei; zudem wurde ein verändertes Gleichgewicht der LDH‑Isoenzyme mit Phänotypen in Verbindung gebracht, die mit Hypoxieantworten und proliferativem Stoffwechsel in verschiedenen krankheitsrelevanten Kontexten assoziiert sind. Als metabolischer Knotenpunkt wird LDH‑B in mechanistischen Studien häufig zusammen mit Kontrollpunkten der Glykolyse, der mitochondrialen Funktion und der Laktat‑Signalgebung untersucht.

Das LDH-B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des LDHB-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des LDHB-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von LDHB nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LDH-B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von LDHB-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LDH-B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf LDHB-Exone abzielen, die für die LDH-B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere LDHB-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LDH-B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LDH-B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des LDHB-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LDH-B HDR-Plasmid (h) und LDH-B HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von LDHB-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten LDHB-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.