LAP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423428

Übersicht

Tmpo kodiert das lamina-assoziierte Polypeptid 2 (LAP2), ein Protein der inneren Kernmembran, das an Laminen und Chromatin bindet und so die Architektur der Kernhülle und die Organisation des Genoms in Mauszellen unterstützt. LAP2-Isoformen tragen zur Kernneubildung nach der Mitose, zur Regulation der Chromatinverankerung sowie zur Koordination der DNA-Replikation und transkriptioneller Programme bei, die mit dem Fortschreiten des Zellzyklus verknüpft sind. Durch Interaktionen mit der Kernlamina und dem Barrier-to-Autointegration Factor (BAF) hilft LAP2, die Mechanotransduktion, die nukleare Stabilität und die räumliche Steuerung der Genexpression zu regulieren. Eine Fehlregulation von Komponenten der Kernhülle und lamina-assoziierten Signalwegen ist in Modellen von Laminopathien, Genominstabilität und veränderten Differenzierungszuständen in entwicklungs- und krankheitsbezogenen Kontexten von breiter Bedeutung.

Das LAP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tmpo-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tmpo-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tmpo nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LAP2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tmpo-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LAP2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tmpo-Exone abzielen, die für die LAP2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tmpo-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LAP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom LAP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tmpo-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LAP2 HDR-Plasmid (m) und LAP2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tmpo-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tmpo-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.