Plásmido Doble Nickase (h) LAMP1: sc-400120-NIC

LAMP1 (proteína 1 de membrana asociada a lisosomas, por sus siglas en inglés) es una proteína de membrana tipo I altamente glicosilada, enriquecida en lisosomas y endosomas tardíos, donde mantiene la integridad del orgánulo y contribuye al posicionamiento de los lisosomas, a la dinámica de fusión y al recambio de la carga. A través de sus funciones en las vías de autofagia-lisosoma, el tráfico endocítico y la estabilidad de la membrana lisosomal, LAMP1 ayuda a coordinar la capacidad degradativa con las respuestas celulares al estrés. LAMP1 también participa en la degranulación de células inmunitarias y en contextos de procesamiento de antígenos, vinculando la función lisosomal con la señalización inflamatoria. La biología lisosomal desregulada en la que interviene LAMP1 se ha asociado con neurodegeneración, enfermedades de almacenamiento lisosomal, interacciones huésped–patógeno relacionadas con infecciones y fenotipos de invasión y metástasis en células cancerosas.

LAMP1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LAMP1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LAMP1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LAMP1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LAMP1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.