Plasmide CRISPR d'Activation (h) Laminin γ-1: sc-401029-ACT

LAMC1 code la laminine γ1, une chaîne de glycoprotéine essentielle de la matrice extracellulaire qui s’assemble avec des sous-unités α et β pour former plusieurs isoformes de laminine dans les membranes basales. La laminine γ1 favorise l’adhérence, la polarité et la migration cellulaires en se liant aux intégrines et à d’autres récepteurs, coordonnant une signalisation qui influence l’organisation du cytosquelette ainsi que les programmes de survie et de différenciation. Par son rôle dans l’intégrité de la membrane basale, LAMC1 contribue à la morphogenèse tissulaire et aux interactions épithélio-mésenchymateuses, des processus fréquemment remaniés dans la fibrose, l’invasion tumorale et les dysfonctionnements vasculaires. Des réseaux de laminine dérégulés et une expression altérée de LAMC1 ont été associés à un dépôt anormal de matrice extracellulaire et à des modifications de la signalisation cellule–matrice observées dans diverses maladies humaines.

Laminin γ-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LAMC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Laminin γ-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LAMC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LAMC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Laminin γ-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LAMC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Laminin γ-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Laminin γ-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de LAMC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.