KV1.3 Double Nickase Plasmid (h): sc-403814-NIC

KCNA3 kodiert den menschlichen spannungsabhängigen Kaliumkanal Kv1.3, eine Leitfähigkeit der Plasmamembran, die dazu beiträgt, das Ruhepotenzial der Membran festzulegen und die Repolarisation von Aktionspotenzialen in erregbaren und nicht erregbaren Zellen zu regulieren. Die Aktivität von Kv1.3 prägt die Ca2+-Signalgebung, indem sie die Membranpolarisierung steuert, und beeinflusst damit Signalwege, die mit aktivierungsinduzierten Transkriptionsprogrammen, Proliferation und Apoptose in Immun- und anderen Zelltypen verknüpft sind. Der Kanal ist an elektrischer Signalübertragung und Prozessen der Ionenhomöostase beteiligt, die den zellulären Stoffwechsel und Stressantworten beeinflussen. Eine fehlregulierte KCNA3-/Kv1.3-Funktion wurde im Zusammenhang mit immunvermittelten Entzündungen und veränderter Erregbarkeit untersucht, was seine Relevanz für Mechanismen unterstreicht, die neurologischen und immunologischen Phänotypen zugrunde liegen.

KV1.3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KCNA3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KCNA3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KCNA3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KCNA3-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.