KV1.3 Plasmide Double Nickase (h): sc-403814-NIC

KCNA3 codifica per il canale del potassio umano voltaggio-dipendente Kv1.3, una conduttanza della membrana plasmatica che contribuisce a stabilire il potenziale di membrana a riposo e a regolare la ripolarizzazione del potenziale d’azione in cellule eccitabili e non eccitabili. L’attività di Kv1.3 modella la segnalazione del Ca2+ controllando la polarizzazione di membrana, influenzando così vie associate a programmi trascrizionali indotti dall’attivazione, proliferazione e apoptosi in cellule immunitarie e in altri tipi cellulari. Il canale partecipa a processi di segnalazione elettrica e omeostasi ionica che incidono sul metabolismo cellulare e sulle risposte allo stress. La disregolazione della funzione di KCNA3/Kv1.3 è stata studiata nel contesto dell’infiammazione immunomediata e di alterazioni dell’eccitabilità, a supporto della sua rilevanza nei meccanismi alla base di fenotipi neurologici e immunologici.

KV1.3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KCNA3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KCNA3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KCNA3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KCNA3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.