Krs-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403632-ACT

STK4 kodiert die Serin/Threonin-Kinase Krs-2 (auch bekannt als MST1), einen zentralen Bestandteil des Hippo-Signalnetzwerks, das Stresssignale integriert, um Proliferation, Apoptose und die Gewebehomöostase zu regulieren. In menschlichen Zellen beeinflusst die Aktivierung von STK4 Kinasekaskaden und transkriptionelle Programme, einschließlich der Modulation der YAP/TAZ-Aktivität sowie der Wechselwirkungen mit MAPK- und immunbezogenen Signalmodulen. Krs-2 ist an der Kontrolle von oxidativen Stressantworten, der Zytoskelettdynamik und der Lymphozytenfunktion beteiligt und verbindet damit die zelluläre Fitness mit der Regulation von Entzündungsprozessen. Eine veränderte STK4-Signalisierung wurde mit einer gestörten Wachstumskontrolle und Immundysfunktion in Verbindung gebracht, was sie für mechanistische Studien der Krebsbiologie und immunbezogener Phänotypen relevant macht.

Krs-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen STK4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Krs-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des STK4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der STK4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Krs-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native STK4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Krs-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Krs-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem STK4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.