KLF6 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400888-ACT

KLF6 (Krüppel-like factor 6) ist ein menschlicher Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der Genprogramme reguliert, welche die Progression des Zellzyklus, die Differenzierung und zelluläre Stressantworten steuern. Er moduliert transkriptionelle Netzwerke, die mit der TGF-β-Signalgebung und MAPK-abhängigen Signalwegen verknüpft sind, und beeinflusst dadurch die Expression von Zielgenen, die an Wachstumshemmung und dem Umbau der extrazellulären Matrix beteiligt sind. Die Aktivität von KLF6 trägt zur Aufrechterhaltung der Gewebehomöostase bei und ist häufig an fehlregulierten Transkriptionszuständen beteiligt, wie sie in der Krebsbiologie und bei fibrotischen Prozessen beobachtet werden. Als kontextabhängiger Regulator dient KLF6 als nützlicher Knotenpunkt, um transkriptionelle Schaltkreise sowie Genotyp-Phänotyp-Beziehungen in diversen Zellmodellen zu untersuchen.

KLF6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KLF6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

KLF6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KLF6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KLF6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen KLF6-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KLF6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von KLF6-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des KLF6-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KLF6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.