KiSS-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402710-NIC

KISS1 codifica KiSS-1, una proteina precursore secreta che viene processata in kisspeptine, le quali segnalano principalmente attraverso l’asse GPR54/KISS1R per regolare la migrazione cellulare, l’invasione e la segnalazione endocrina. L’attività di KiSS-1 si interseca con vie guidate da GPCR, tra cui PLC/PKC, i flussi intracellulari di calcio e la segnalazione MAPK, modellando programmi trascrizionali legati al potenziale metastatico e al controllo neuroendocrino della riproduzione. Un’espressione alterata di KISS1 è stata associata alla progressione tumorale e alla disseminazione metastatica in diversi contesti oncologici, nonché alla disregolazione dell’asse ipotalamo–ipofisi–gonadi nei disturbi riproduttivi. Queste caratteristiche rendono KISS1 un nodo utile per studiare i meccanismi di soppressione delle metastasi, la comunicazione cellula–cellula e le reti geniche regolate dagli ormoni nelle cellule umane.

KiSS-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KISS1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KISS1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KISS1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KISS1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.