Plásmido Doble Nickase (m) KIR6.2: sc-421232-NIC

Kcnj11 codifica la subunidad del canal de potasio rectificador hacia el interior KIR6.2, un componente central de los canales de K+ sensibles a ATP (KATP) que acoplan el estado energético celular con la excitabilidad de la membrana. En las células β pancreáticas de ratón, KIR6.2 se asocia con los receptores de sulfonilurea para regular la conductancia de K+, la entrada de calcio y la dinámica de secreción de insulina en respuesta a cambios en la relación ATP/ADP. En tejidos excitables, como el corazón, el cerebro y el músculo esquelético, la actividad de los canales KATP influye en el disparo de potenciales de acción, las respuestas al estrés metabólico y la citoprotección durante desafíos energéticos. La desregulación del “gating” (apertura/cierre) del canal asociado a Kcnj11 se ha vinculado con alteraciones de la homeostasis de la glucosa y fenotipos de excitabilidad, lo que lo convierte en un objetivo ampliamente utilizado para estudios mecanísticos del acoplamiento entre metabolismo y señalización eléctrica.

KIR6.2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Kcnj11 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Kcnj11. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Kcnj11. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Kcnj11 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.