KIR3.4 Double Nickase Plasmid (h): sc-404643-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das KIR3.4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- KIR3.4 Double-Nickase-Plasmid (h) und KIR3.4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KCNJ5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: KIR3.4: sc-293378
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
KIR3.4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404643-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
KIR3.4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404643-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **KCNJ5** kodiert die inward-rectifying Kaliumkanal‑Untereinheit **KIR3.4 (GIRK4)**, die sich mit anderen Mitgliedern der GIRK‑Familie zu G‑Protein‑gesteuerten K+-Kanälen zusammenlagert, welche GPCR‑Signalgebung mit der Hyperpolarisation der Membran koppeln. Durch die Leitung von Kalium unter Kontrolle der **Gβγ‑Untereinheiten** trägt KIR3.4 zur Regulation der zellulären Erregbarkeit, der Schrittmacheraktivität und stimulusabhängiger Änderungen des Membranpotentials bei, die den Kalziumeinstrom und nachgeschaltete Signalwege prägen. **KCNJ5** ist an der Aldosteronregulation in Zellen der **Zona glomerulosa** der Nebenniere beteiligt, und wiederkehrende Varianten wurden mit Erkrankungen des Mineralokortikoid‑Überschusses sowie damit verbundenen kardiometabolischen Phänotypen in Zusammenhang gebracht. Eine veränderte KIR3.4‑Funktion ist zudem für elektrophysiologisch ausgerichtete Studien der kardialen und neuroendokrinen Signalübertragung relevant, einschließlich der Modulation von GPCR‑Signalwegen und der Ionenhomöostase.
KIR3.4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KCNJ5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KCNJ5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KCNJ5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KCNJ5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.