KIF20A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403194

Übersicht

KIF20A (auch bekannt als MKlp2) kodiert ein kinesinähnliches Motorprotein, das an Mikrotubuli bindet und den Ablauf der Mitose, den Aufbau der zentralen Spindel und die Zytokinese koordiniert. Es unterstützt die korrekte Chromosomentrennung und die Bildung des Midbody, indem es die Mikrotubulusdynamik sowie mit dem Spindelkontrollpunkt verknüpfte Prozesse reguliert. Die Aktivität von KIF20A ist mit Zellzyklus-Kontrollwegen verbunden, die den G2/M-Übergang und den Austritt aus der Mitose steuern; eine Fehlregulation wird in der Humanmedizin häufig im Zusammenhang mit abnormer Proliferation und Aneuploidie untersucht. Als mitoseassoziierter Motor wird KIF20A in Modellen der Krebsbiologie häufig als funktioneller Knotenpunkt genutzt, um Zytoskelett-Remodelling, die Positionierung der Teilungsebene und Abhängigkeiten proliferativer Signalwege zu untersuchen.

Das KIF20A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KIF20A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KIF20A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KIF20A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KIF20A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KIF20A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KIF20A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KIF20A-Exone abzielen, die für die KIF20A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KIF20A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KIF20A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom KIF20A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KIF20A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KIF20A HDR-Plasmid (h) und KIF20A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KIF20A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KIF20A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.