KIF17 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403046-ACT

KIF17 (Kinesin-Familienmitglied 17) kodiert einen zum Plusende gerichteten Mikrotubuli-Motor, der den intrazellulären Transport in polarisierten Zellen unterstützt, mit ausgeprägten Funktionen beim neuronalen Cargo-Transport und der Kompartimentierung von Zilien. Durch die Kopplung der ATP-abhängigen Motilität an die Mikrotubuli-Dynamik trägt KIF17 zu Prozessen wie dendritischem Transport, synaptischer Funktion und der Regulation zilienassoziierter Signalwege bei. Eine veränderte KIF17-Expression oder -Lokalisation wurde im Zusammenhang mit neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Phänotypen sowie mit ciliopathierelevanten Defekten in Transport und Signalübertragung untersucht. Diese Eigenschaften machen KIF17 zu einem nützlichen Ziel, um mikrotubulibasierten Transport, neuronale Zellbiologie und zilienverknüpfte regulatorische Netzwerke zu untersuchen.

KIF17 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KIF17-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

KIF17 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KIF17-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KIF17-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen KIF17-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KIF17-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von KIF17-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des KIF17-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KIF17-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.