KIF14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-408805

Übersicht

KIF14 kodiert einen Mikrotubuli-Motor der Kinesin-3-Familie, der an der mitotischen Spindel und am Midbody lokalisiert und so Chromosomentrennung und Zytokinese koordiniert. Es unterstützt den Zellzyklusfortschritt, indem es die Spindeldynamik, die Organisation der zentralen Spindel und den Abschluss der Abszission reguliert und damit mikrotubulibasierten Transport mit späten mitotischen Ereignissen verknüpft. Eine aberrante Expression oder Aktivität von KIF14 ist in der Krebsbiologie häufig mit veränderter Proliferationsfähigkeit, Aneuploidie und genomischer Instabilität assoziiert. Daher wird KIF14 häufig in Signalwegen untersucht, die die mitotische Fehlerfreiheit, das Remodeling des Zytoskeletts und proliferationsassoziierte Transkriptionsprogramme steuern.

Das KIF14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KIF14-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KIF14-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KIF14 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KIF14-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KIF14-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KIF14-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KIF14-Exone abzielen, die für die KIF14-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KIF14-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KIF14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom KIF14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KIF14-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KIF14 HDR-Plasmid (h) und KIF14 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KIF14-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KIF14-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.