Plásmido CRISPR de Activación (h) Keap1: sc-400190-ACT

El gen humano **KEAP1** codifica la proteína 1 asociada a ECH tipo Kelch (Keap1), un adaptador citosólico de un complejo ligasa de ubiquitina E3 basado en **CUL3** que regula el recambio proteasomal de **NRF2 (NFE2L2)**. Al detectar el estrés electrofílico y oxidativo mediante residuos de cisteína reactivos, Keap1 modula la acumulación nuclear de NRF2 y la transcripción de genes de respuesta antioxidante, de desintoxicación y metabólica. Este eje **KEAP1–NRF2** integra la homeostasis redox con la proteostasis y la señalización relacionada con la inflamación, influyendo en la susceptibilidad celular a xenobióticos y al estrés mitocondrial. La desregulación de la función de KEAP1 y la actividad alterada de NRF2 se estudian con frecuencia en biología del cáncer y en otros trastornos caracterizados por estrés oxidativo y reprogramación metabólica.

Keap1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KEAP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Keap1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KEAP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KEAP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Keap1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KEAP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Keap1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Keap1 en células tumorales con expresión de KEAP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.