Partículas Lentivirales de Activación (h) KCNQ4: sc-403090-LAC

KCNQ4 codifica una subunidad de canal de potasio dependiente de voltaje que contribuye a la repolarización de la membrana y al control de la excitabilidad celular a través de corrientes de tipo M. Al regular la conductancia de potasio, KCNQ4 influye en la dinámica de disparo de los potenciales de acción, la homeostasis iónica y los programas de señalización downstream dependientes de la actividad en células excitables. Las alteraciones en la función o la expresión de KCNQ4 se asocian con propiedades electrofisiológicas alteradas y se han relacionado con formas hereditarias de hipoacusia neurosensorial, lo que respalda su relevancia para la biología del sistema auditivo. Estas propiedades convierten a KCNQ4 en una diana útil para estudios mecanísticos sobre la regulación de canales de potasio, la transcripción dependiente de la excitabilidad y las relaciones genotipo–fenotipo en modelos celulares relevantes para enfermedades.

Las partículas de activación lentiviral KCNQ4 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de KCNQ4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral KCNQ4 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción KCNQ4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de KCNQ4. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo KCNQ4 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.