Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
KCNQ1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400933-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das KCNQ1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- KCNQ1 Double-Nickase-Plasmid (h) und KCNQ1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KCNQ1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: KCNQ1: sc-365186
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
KCNQ1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400933-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
KCNQ1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400933-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KCNQ1 kodiert eine spannungsabhängige Kaliumkanal-α‑Untereinheit, die sich zu einem Tetramer assembliert und in vielen Geweben mit β‑Untereinheiten der KCNE‑Familie zusammenwirkt, um die Repolarisation der Membran zu formen. In erregbaren Zellen tragen KCNQ1‑vermittelte Ströme zur Beendigung des Aktionspotenzials und zur elektrischen Stabilität bei, während der Kanal in Epithelien die Regulation des Ionentransports und der Flüssigkeitshomöostase unterstützt. Die Kanalaktivität wird durch Signalinputs wie cAMP/PKA‑abhängige Phosphorylierung und membranständige Phosphoinositide moduliert und verknüpft KCNQ1 damit mit der übergeordneten Steuerung zellulärer Erregbarkeit und von Transportprozessen. Genetische und epigenetische Veränderungen in KCNQ1 wurden mit kardialen Arrhythmie‑Phänotypen und Störungen der Regulation im imprinteten Lokus in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für mechanistische Studien der Elektrophysiologie und der Genregulation untermauert.
KCNQ1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KCNQ1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KCNQ1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KCNQ1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KCNQ1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.