Plásmido Doble Nickase (h) K-cadherin: sc-401455-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)K-cadherin consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa K-cadherin (h) y el plásmido de doble nickasa K-cadherin (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CDH6. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: K-cadherin Anticuerpo (2B6): sc-59974
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) K-cadherin | sc-401455-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) K-cadherin | sc-401455-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDH6 codifica la K-cadherina, una molécula clásica de adhesión célula–célula dependiente de calcio que favorece la cohesión epitelial y la morfogénesis tisular mediante interacciones homofílicas en las uniones adherentes. Al acoplarse a las cateninas y al citoesqueleto de actina, la K-cadherina contribuye a la señalización dependiente del contacto, la polaridad celular y programas de migración coordinada. La expresión de CDH6 es destacada durante el desarrollo, incluso en tejidos renales y neurales, y su desregulación se ha asociado con estados de adhesión alterados vinculados a la progresión tumoral y fenotipos relacionados con la invasión. Estas propiedades hacen de CDH6 un objetivo útil para estudiar la dinámica de las uniones mediadas por cadherinas, las transiciones epitelio–mesénquima y las redes de señalización dependientes de la adhesión.
K-cadherin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CDH6 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CDH6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CDH6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CDH6 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.