JRAB Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-410130

Panoramica

MICALL2 codifica JRAB (noto anche come MICAL-L2), un effettore di Rab13 che funge da impalcatura collegando i macchinari del traffico vescicolare al rimodellamento del citoscheletro di actina nelle giunzioni cellula–cellula. JRAB partecipa alla regolazione dell’organizzazione delle giunzioni aderenti e serrate, del riciclo di membrana e del trasporto polarizzato, influenzando l’integrità della barriera epiteliale e la migrazione direzionale. Attraverso interazioni con le Rab GTPasi e con componenti giunzionali, MICALL2 contribuisce a vie che governano la dinamica del citoscheletro e il trasporto intracellulare. Un’espressione o regolazione alterata di MICALL2 è stata riportata in studi sull’invasione tumorale e su fenotipi associati alla metastasi, rendendolo rilevante per investigare i meccanismi di perdita della polarità cellulare e della motilità.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO JRAB (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MICALL2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MICALL2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MICALL2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina JRAB.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MICALL2 per lo studio della segnalazione di JRAB, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MICALL2 critici per la funzione di JRAB
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MICALL2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal JRAB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal JRAB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MICALL2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal JRAB Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR JRAB (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MICALL2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MICALL2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.