Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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JMJD1A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403423
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- JMJD1A Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico JMJD1A, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: JMJD1A Antibody (H-1): sc-398946
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
JMJD1A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-403423 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
KDM3A codifica JMJD1A, una demetilasi degli istoni contenente il dominio Jumonji C (JmjC) che rimuove principalmente i segni repressivi H3K9me1/2 per promuovere l’attivazione trascrizionale. Rimodellando l’accessibilità della cromatina, JMJD1A modula programmi legati alla segnalazione dei recettori ormonali, alle risposte all’ipossia, all’espressione di geni metabolici e alle decisioni sul destino cellulare. La sua attività si interseca con la regolazione epigenetica degli stati di enhancer e promotori, influenzando vie che governano proliferazione, differenziamento e adattamento allo stress. Un’espressione o una funzione deregolate di KDM3A/JMJD1A sono state associate a reti trascrizionali alterate osservate in molteplici contesti oncologici e fenotipi metabolici, a supporto dell’indagine su vulnerabilità epigenetiche.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO JMJD1A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KDM3A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KDM3A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KDM3A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina JMJD1A.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KDM3A per lo studio della segnalazione di JMJD1A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni KDM3A critici per la funzione di JMJD1A
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KDM3A per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal JMJD1A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal JMJD1A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KDM3A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal JMJD1A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR JMJD1A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KDM3A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KDM3A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.