ITM1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405155-NIC

ヒトSTT3Aは、小胞体において新生ポリペプチドの共翻訳的N結合型糖鎖付加を担うオリゴ糖転移酵素（OST）複合体の触媒サブユニットをコードしている。STT3Aは、コンセンサス配列（シークオン）内のAsn残基にあらかじめ組み立てられた糖鎖を転移することで、タンパク質のフォールディング、品質管理、輸送を支えるとともに、小胞体恒常性や小胞体ストレス応答（UPR：ユニフォールド・プロテイン・レスポンス）にも影響を与える。STT3A依存的な糖鎖付加が攪乱されると、受容体の成熟やシグナル伝達が再編され、細胞表面におけるプロテオスタシスが変化し、分泌経路の処理能力にも影響が及びうる。N結合型糖鎖付加の異常や小胞体ストレス経路の破綻は、糖鎖付加異常症（先天性糖鎖付加異常症）や、がんに伴うプロテオスタシス適応など、多様な病態に関与することが示唆されており、そのためSTT3Aは機序解明研究の有用な標的となる。

ITM1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における STT3A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、STT3A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、STT3Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、STT3Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。