Plásmido CRISPR de Activación (m) Islet-1: sc-421157-ACT

Mouse *Isl1* codifica Islet-1, un factor de transcripción LIM-homeodominio que coordina la especificación del destino celular y los programas de diferenciación durante la embriogénesis. Islet-1 regula redes génicas implicadas en el desarrollo endocrino pancreático, la formación de motoneuronas y la biología de progenitores cardiacos, integrándose con vías de señalización del desarrollo para controlar el compromiso de linaje y la maduración. La actividad desregulada de ISL1 se ha vinculado, en sistemas modelo, con cambios en la identidad y la función de las células β, defectos del neurodesarrollo que afectan circuitos motores y fenotipos cardiacos congénitos, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar el control transcripcional de la organogénesis. Como marcador de linaje y de progenitores, Islet-1 se utiliza con frecuencia para trazar trayectorias del desarrollo y para investigar elementos reguladores que determinan la expresión génica específica de tejido.

Islet-1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Isl1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Islet-1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Isl1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Isl1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Islet-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Isl1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Islet-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Islet-1 en células tumorales con expresión de Isl1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.