IRS-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400474

Übersicht

Insulinrezeptor-Substrat 2 (IRS-2) ist ein zytoplasmatisches Adapterprotein, das aktivierte Insulin- und IGF-1-Rezeptoren mit nachgeschalteten Signalwegen über die PI3K–AKT- und RAS–MAPK-Kaskaden koppelt. Durch rezeptorvermittelte Tyrosinphosphorylierung rekrutiert IRS2 SH2-Domänen-enthaltende Effektoren, um Glukosestoffwechsel, Lipidhomöostase, Zellwachstum, Überleben und Differenzierung zu regulieren. Die IRS2-abhängige Signalübertragung trägt zur Insulinwirkung in der Leber, zur Funktion pankreatischer β-Zellen und zur Energiebilanz bei; ihre Fehlregulation wird häufig im Zusammenhang mit Insulinresistenz, Typ-2-Diabetes, Adipositas und verwandten metabolischen Phänotypen untersucht. Veränderte IRS2-Signalgebung wurde zudem mit kontextabhängigen Effekten auf Proliferation und Motilität in Verbindung gebracht, was ihren Einsatz in der Forschung zu Signalwegen und Krankheitsmechanismen unterstützt.

Das IRS-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des IRS2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des IRS2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von IRS2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IRS-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von IRS2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IRS-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf IRS2-Exone abzielen, die für die IRS-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere IRS2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IRS-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom IRS-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des IRS2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IRS-2 HDR-Plasmid (h) und IRS-2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von IRS2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten IRS2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.