IRAK-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404304-ACT

Humanes IRAK2 kodiert die Interleukin-1-Rezeptor-assoziierte Kinase 2 (IRAK-2), eine Signalkinase, die die Aktivierung von Toll-like-Rezeptoren (TLR) und des IL-1-Rezeptors mit nachgeschalteten entzündlichen Transkriptionsprogrammen koppelt. IRAK-2 wirkt innerhalb des MyD88-abhängigen Signalwegs, indem sie den Aufbau und die Signalweiterleitung des IRAK-Komplexes fördert, die Aktivierung der NF-κB- und MAPK-Kaskaden erleichtert und so die Expression von Zytokinen und Chemokinen prägt. Über diese Prozesse trägt IRAK-2 zur Koordination angeborener Immunantworten bei; eine fehlregulierte Signalübertragung wird mit chronischer Entzündung und einer veränderten Immunhomöostase in Verbindung gebracht. Aufgrund ihrer Vernetzung in Signalwegen ist IRAK2 ein nützlicher Knotenpunkt, um stimulusabhängige transkriptionelle Outputs, Feedback-Regulation und das Cross-Talk zwischen Entzündungs- und Stressantwortwegen zu untersuchen.

IRAK-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IRAK2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IRAK-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IRAK2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IRAK2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IRAK-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IRAK2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IRAK-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IRAK-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IRAK2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.