Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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IP3R-II Double Nickase Plasmid (h): sc-401067-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IP3R-II Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IP3R-II Double-Nickase-Plasmid (h) und IP3R-II Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ITPR2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IP3R-II: sc-398434
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IP3R-II Double Nickase Plasmid (h) | sc-401067-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IP3R-II Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401067-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ITPR2 kodiert den Inositol-1,4,5-trisphosphat-Rezeptor Typ 2 (IP3R‑II), einen Ca²⁺-Freisetzungskanal des endoplasmatischen Retikulums, der durch Phospholipase C erzeugte IP₃-Signale in zytosolische Calciumtransienten umsetzt. Der durch IP3R‑II vermittelte Ca²⁺-Fluss reguliert die Kopplung von Erregung und Sekretion, Signalprozesse in Epithel- und Endothelzellen sowie Transkriptionsprogramme über Signalwege wie CaMK, Calcineurin/NFAT und den mitochondrialen Ca²⁺-Cross-Talk. Über räumlich begrenzte Ca²⁺-Wellen beeinflusst IP3R‑II den Zellstoffwechsel, die Anfälligkeit für Apoptose sowie Barriere- bzw. Transportfunktionen in spezialisierten Geweben. Eine veränderte Aktivität oder Expression von ITPR2 wurde mit einer dysregulierten Ca²⁺-Homöostase in Erkrankungen in Verbindung gebracht, die sekretorische Epithelien und verwandte physiologische Prozesse betreffen, was seinen Einsatz in mechanistischen Studien zu Calcium-Signalnetzwerken unterstützt.
IP3R-II Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ITPR2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ITPR2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ITPR2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ITPR2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.