Partículas Lentivirales de Activación (h) INTS3: sc-408952-LAC

INTS3 codifica la subunidad 3 del Complejo Integrator, un componente central de la maquinaria Integrator que coordina el procesamiento de ARN asociado a la ARN polimerasa II, incluida la formación del extremo 3′ de los snRNA y programas más amplios de control transcripcional. A través de su participación en la pausa y la terminación transcripcionales dependientes de Integrator, INTS3 influye en la maduración del ARN, la homeostasis de la expresión génica y vías posteriores vinculadas a la progresión del ciclo celular y al mantenimiento del genoma. La alteración de subunidades de Integrator se ha relacionado con redes transcripcionales desreguladas y respuestas celulares al estrés, lo que convierte a INTS3 en un nodo útil para analizar defectos en la biogénesis de ARN y procesos acoplados a la transcripción relevantes para cambios en la expresión génica asociados a enfermedades.

Las partículas de activación lentiviral INTS3 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de INTS3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral INTS3 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción INTS3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de INTS3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo INTS3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.