Integrin β8/ITGB8 Plasmide Double Nickase (h): sc-401379-NIC

ITGB8 codifica l’integrina β8, una subunità recettoriale di adesione transmembrana a singolo passaggio che si associa all’integrina αV per formare αVβ8, collegando i ligandi della matrice extracellulare alle reti citoscheletriche e di segnalazione intracellulari. αVβ8 è un regolatore chiave dell’attivazione del TGF-β latente sulla superficie cellulare, plasmando programmi trascrizionali dipendenti da SMAD che influenzano le interazioni epitelio-mesenchimali, la modulazione immunitaria e il rimodellamento tissutale. Attraverso la segnalazione outside-in mediata dalle integrine e la dinamica delle adesioni focali, ITGB8 contribuisce all’adesione cellulare, alla migrazione e all’organizzazione delle barriere. Un’espressione deregolata di ITGB8 o un’alterata attività di αVβ8 sono state associate a stati di segnalazione del TGF-β modificati, osservati in contesti quali il rimodellamento del microambiente tumorale, i processi fibrotici e lo sviluppo neurovascolare.

Integrin β8/ITGB8 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ITGB8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ITGB8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ITGB8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ITGB8 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.