Integrin β4/ITGB4/CD104 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-431434-ACT

Itgb4 kodiert Integrin β4 (ITGB4/CD104), einen transmembranen Adhäsionsrezeptor, der sich vorwiegend mit Integrin α6 zum Heterodimer α6β4 verbindet, einem zentralen Lamininrezeptor für die Anheftung von Epithelien an die Basalmembran. Über die Bildung von Hemidesmosomen sowie durch Crosstalk mit fokalen Adhäsionen und der Wachstumsfaktor-Signalgebung trägt ITGB4 zur Koordination von Zellpolarität, Migration und Überlebenswegen bei, darunter PI3K–AKT- und MAPK-Signalkaskaden. Eine veränderte ITGB4-Expression oder -Signalgebung ist mit Veränderungen der epithelialen Integrität, invasivem Verhalten und dem Umbau der extrazellulären Matrix verbunden, weshalb ITGB4 für Studien zur Karzinomprogression, Wundheilung und entzündlichem Gewebeumbau relevant ist. In Mausmodellen wird Itgb4 häufig eingesetzt, um epithel–stromale Interaktionen und adhäsionsabhängige Signalnetzwerke in organotypischen und in vivo Modellen zu untersuchen.

Integrin β4/ITGB4/CD104 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Itgb4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Integrin β4/ITGB4/CD104 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Itgb4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Itgb4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Integrin β4/ITGB4/CD104-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Itgb4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Integrin β4/ITGB4/CD104-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Integrin β4/ITGB4/CD104-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Itgb4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.