Integrin α1/ITGA1/CD49a CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401275-ACT

ITGA1 kodiert Integrin α1 (CD49a), eine α‑Untereinheit, die mit Integrin β1 zu einem α1β1‑Kollagen/Laminin‑Rezeptor dimerisiert und die Zell‑Extrazellulärmatrix‑Adhäsion vermittelt. Dieser Rezeptor reguliert die Signalgebung an Fokalkontakten, den Umbau des Zytoskeletts sowie nachgeschaltete Signalwege wie FAK/Src, MAPK/ERK und PI3K‑AKT, die Migration, Überleben und Differenzierung beeinflussen. Die ITGA1‑Aktivität trägt zur ECM‑Wahrnehmung, zur Mechanotransduktion und zum Gewebe‑Remodeling in stromalen und immunologischen Kontexten bei, einschließlich kollagenreicher Mikroumgebungen. Eine fehlregulierte Integrin‑α1‑Signalgebung wurde in mehreren krankheitsrelevanten Modellen, in denen ECM‑Zusammensetzung und Adhäsionssignalwege verändert sind, mit fibrotischem Remodeling, dem Trafficking entzündlicher Zellen und Tumorzellinvasion in Verbindung gebracht.

Integrin α1/ITGA1/CD49a Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ITGA1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Integrin α1/ITGA1/CD49a Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ITGA1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ITGA1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Integrin α1/ITGA1/CD49a-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ITGA1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Integrin α1/ITGA1/CD49a-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Integrin α1/ITGA1/CD49a-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ITGA1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.