Plásmido CRISPR de Activación (h) Inhibin β-B: sc-402060-ACT

INHBB codifica la subunidad beta B de la inhibina humana, un ligando de la superfamilia TGF-β que forma homodímeros de activina B o heterodímeros de activina AB para regular decisiones sobre el destino celular y la señalización endocrina. Las activinas señalizan principalmente a través de receptores de tipo II/I con actividad serina/treonina quinasa para activar programas transcripcionales dependientes de SMAD2/3, influyendo en la proliferación, la diferenciación, la remodelación de la matriz extracelular y las respuestas inflamatorias de manera dependiente del contexto. La actividad de INHBB es relevante para la biología reproductiva y la función gonadal, y se ha asociado un equilibrio alterado entre activina e inhibina con un crecimiento y una remodelación tisular desregulados en diversos estados patológicos, incluidas la fibrosis y redes de señalización relacionadas con el cáncer. Dado que INHBB integra señales paracrinas y autocrinas, se estudia con frecuencia en vías que controlan programas del desarrollo y la regulación de la expresión génica mediada por el microambiente.

Inhibin β-B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de INHBB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Inhibin β-B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus INHBB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional INHBB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Inhibin β-B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo INHBB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Inhibin β-B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Inhibin β-B en células tumorales con expresión de INHBB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.