Plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-5 (m): sc-421112

Présentation

Il5 code l’interleukine-5 (IL‑5), une cytokine associée aux Th2 qui coordonne l’engagement de la lignée éosinophilique, la survie et l’activation des éosinophiles, et soutient la prolifération des lymphocytes B ainsi que la commutation isotypique chez la souris. L’IL‑5 transmet ses signaux via le récepteur de l’IL‑5 (IL5RA avec la chaîne β commune), activant les voies JAK/STAT, MAPK et PI3K, ce qui façonne les programmes immunitaires de type 2 et le trafic des granulocytes. Une activité d’IL‑5 dérégulée est associée à une inflammation médiée par les éosinophiles et à des réponses allergiques des voies aériennes, faisant d’Il5 un nœud central pour l’analyse des réseaux de cytokines qui contrôlent l’immunité muqueuse. Dans les modèles expérimentaux, la perturbation d’Il5 est utilisée pour étudier la différenciation des leucocytes, les circuits chimiotactiques et le dialogue entre cytokines lors des réponses aux helminthes et de l’inflammation allergique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-5 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Il5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Il5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Il5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IL-5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Il5 pour l'étude de la signalisation de IL-5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Il5 essentiels à la fonction de IL-5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Il5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IL-5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IL-5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Il5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IL-5 plasmide HDR (m) et le IL-5 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Il5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Il5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.