IL-3/IL-5/GM-CSFRβ Double Nickase Plasmid (h): sc-401045-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IL-3/IL-5/GM-CSFRβ Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IL-3/IL-5/GM-CSFRβ Double-Nickase-Plasmid (h) und IL-3/IL-5/GM-CSFRβ Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CSF2RB abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IL-3/IL-5/GM-CSFRβ: sc-21765
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IL-3/IL-5/GM-CSFRβ Double Nickase Plasmid (h) | sc-401045-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IL-3/IL-5/GM-CSFRβ Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401045-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CSF2RB kodiert die gemeinsame Beta-Kette (βc), die von den humanen IL-3-, IL-5- und GM-CSF-Rezeptoren gemeinsam genutzt wird. Dadurch werden hochaffine Signalgebungskomplexe gebildet, die Proliferation, Überleben und Differenzierung hämatopoetischer Vorläuferzellen regulieren. Nach Zytokinbindung aktiviert die βc-abhängige Signalübertragung die JAK2/STAT5-, PI3K–AKT- und RAS–MAPK-Signalwege und koordiniert damit die Festlegung auf myeloide Linien sowie inflammatorische Effektorfunktionen. Die CSF2RB-Aktivität prägt Granulozyten- und Makrophagenantworten und beeinflusst zytokingetriebene Zellzustandsübergänge in Immun- und hämatologischen Systemen. Eine Fehlregulation der βc-Signalgebung wurde mit aberranter myeloider Aktivierung und inflammatorischen Programmen in Verbindung gebracht, was CSF2RB zu einem zentralen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Zytokinrezeptor-Signalübertragung macht.
IL-3/IL-5/GM-CSFRβ Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CSF2RB-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CSF2RB abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CSF2RB-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CSF2RB-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.