IL-1RAcP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421101

Übersicht

Il1rap kodiert IL-1RAcP, einen essenziellen Korezeptor, der mit Mitgliedern der IL-1‑Rezeptorfamilie Komplexe bildet, um Signale weiterzuleiten, die durch IL-1α/IL-1β und verwandte Liganden ausgelöst werden. Nach der Rezeptorbindung unterstützt IL-1RAcP den Zusammenbau MyD88‑abhängiger Signalkomplexe, die IRAK–TRAF6‑Kaskaden aktivieren und dadurch NF‑κB‑ und MAPK‑Signalwege sowie nachgeschaltete Transkriptionsprogramme anstoßen, welche Entzündung, angeborene Immunantworten und die Kommunikation zwischen Stroma und Immunsystem steuern. In Mausmodellen wird eine veränderte IL-1R/IL-1RAcP‑Signalgebung häufig genutzt, um Mechanismen zu untersuchen, die chronische Entzündungszustände, Gewebeschädigungsreaktionen und durch Zytokine verstärktes Remodeling in unterschiedlichen Organsystemen antreiben. Da IL-1RAcP mehrere Signale aus der IL-1‑Familie integriert, ist es relevant, um Signalweg‑Crosstalk zu analysieren, der die Rekrutierung von Leukozyten, die Barrierefunktion und die Expression entzündungsassoziierter Gene prägt.

Das IL-1RAcP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Il1rap-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Il1rap-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Il1rap nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IL-1RAcP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Il1rap-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IL-1RAcP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Il1rap-Exone abzielen, die für die IL-1RAcP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Il1rap-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IL-1RAcP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom IL-1RAcP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Il1rap-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IL-1RAcP HDR-Plasmid (m) und IL-1RAcP HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Il1rap-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Il1rap-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.