Plásmido CRISPR de Activación (m) IL-15: sc-421089-ACT

El gen murino **Il15** codifica la interleucina-15 (IL-15), una citocina pleiotrópica que favorece el desarrollo, la supervivencia y la activación de las células NK y de las células T CD8+ con fenotipo de memoria. La IL-15 señaliza a través de la cadena β del receptor de IL-2/15 y la cadena γ común, con transpresentación mediada por IL-15Rα, activando las vías JAK1/3–STAT5, PI3K–AKT y MAPK para regular la proliferación y los programas citotóxicos. Mediante estas redes, la IL-15 moldea la vigilancia inmunitaria antiviral y antitumoral y contribuye a circuitos inflamatorios que influyen en la homeostasis tisular. La expresión desregulada de IL-15 se ha implicado en patología mediada por el sistema inmunitario y en una dinámica alterada de los linfocitos, lo que convierte a **Il15** en un nodo útil para estudiar la inmunidad impulsada por citocinas.

IL-15 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Il15 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IL-15 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Il15 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Il15, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IL-15. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Il15 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IL-15 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IL-15 en células tumorales con expresión de Il15 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.