IL-10Rα Double Nickase Plasmid (h): sc-402486-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IL-10Rα Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IL-10Rα Double-Nickase-Plasmid (h) und IL-10Rα Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf IL10RA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IL-10Rα: sc-365374
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IL-10Rα Double Nickase Plasmid (h) | sc-402486-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IL-10Rα Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402486-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IL10RA kodiert die Alpha-Kette des Interleukin-10-Rezeptors (IL‑10Rα), eine hochaffine Bindungskomponente, die für die IL‑10‑abhängige antiinflammatorische Signalübertragung erforderlich ist. Nach Ligandenbindung bildet IL‑10Rα zusammen mit IL10RB einen Rezeptorkomplex, der JAK1/TYK2 und nachgeschaltete, STAT3‑vermittelte Transkriptionsprogramme aktiviert. Diese begrenzen die Produktion proinflammatorischer Zytokine und modulieren die Funktion antigenpräsentierender Zellen. Der Signalweg prägt die myeloide und lymphoide Immunhomöostase an mukosalen und systemischen Orten und beeinflusst dabei die Polarisierung von Makrophagen, die Reifung dendritischer Zellen und T‑Zell‑Antworten. Genetische oder funktionelle Störungen von IL10RA sind mit Immundysregulation und entzündlichen Krankheitsphänotypen assoziiert, was seine Relevanz für Studien zur Zytokinsignalgebung, zu Wirt–Mikrobiom‑Interaktionen und zur Barriereimmunität unterstreicht.
IL-10Rα Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IL10RA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IL10RA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IL10RA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IL10RA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.