IL-10Rα CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402486-ACT
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- IL-10Rα CRISPR Activation Plasmid (h) ist ein Transkriptionsaktivierungs System (SAM) welches für die gezielte Verstärkung der Genexpression bestimmt ist
- IL-10Rα CRISPR Aktivierungsplasmide (h) bestehen aus 3 Plasmiden im Massenverhältnis 1:1:1: ein Plasmid kodiert für die deaktivierte Cas9 (dCas9) Nuklease (D10A und N863A) fusioniert an die Transaktivierungsdomaine VP64 sowie ein Gen für die Blasticidin Resistenz; ein zweites Plasmid kodierend für das MS2-p65-HSF1 Fusionsprotein sowie ein Gen für die Hygromycin Resistenz; ein drittes Plasmid kodierd für die Ziel-spezifische 20 nt guide RNA fusioniert an zwei MS2 RNA Aptamere sowie ein Gen für die Puromycin Resistenz.
- Der entstehende SAM-Komplex (Mediator-Komplex zur synergistischen Gen-Aktivierung) bindet eine sequenzspezifische Region 200-250 nt upstream (in 5'-Richtung) des Transkriptionsstartsignals und rekrutiert dort ständig Transkriptionsfaktoren für eine verstärkte Gen-Aktivierung und Gen-Expression.
- Die vom IL-10Rα CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) und vom IL-10Rα CRISPR-Aktivierungsplasmid (h2) kodierten gRNAs zielen auf unterschiedliche regulatorische Regionen stromaufwärts der IL10RA-Transkriptionsstartstelle ab. Eines oder beide Designs sind möglicherweise verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IL-10Rα: sc-365374
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IL-10Rα CRISPR Activation Plasmid (h) | sc-402486-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
IL-10Rα CRISPR Activation Plasmid (h2) | sc-402486-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
IL10RA kodiert die Alpha-Untereinheit des Interleukin‑10‑Rezeptors (IL‑10Rα), eine hochaffine, Zytokin-bindende Komponente, die mit IL10RB dimerisiert und so den funktionellen IL‑10‑Rezeptorkomplex bildet. Nach Bindung von IL‑10 aktiviert der Rezeptor die JAK1/TYK2-Signalübertragung sowie nachgeschaltete, STAT3‑abhängige Transkriptionsprogramme, die die Produktion entzündungsfördernder Zytokine begrenzen, die Aktivierung antigenpräsentierender Zellen einschränken und eine gewebeschützende Immunregulation unterstützen. Die Funktion von IL‑10Rα ist daher zentral für die Homöostase von Makrophagen und dendritischen Zellen, für immunologische Toleranz im Zusammenhang mit epithelialen Barrieren und für die Auflösung von Entzündungen. Eine Fehlregulation der IL10RA‑vermittelten Signalwege ist mit abweichender Immunaktivierung und entzündlicher Pathologie assoziiert und damit relevant für Studien zur mukosalen Immunologie, Autoimmunität und zu Wirt–Mikroben‑Interaktionen.
IL-10Rα Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IL10RA-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.
IL-10Rα Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IL10RA-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.
Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IL10RA-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IL-10Rα-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IL10RA-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IL-10Rα-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IL-10Rα-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IL10RA-Ausdruck.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.