Plásmido Doble Nickase (m) IL-10: sc-421076-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)IL-10 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa IL-10 (m) y el plásmido de doble nickasa IL-10 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Il10. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: IL-10 Anticuerpo (A-2): sc-365858
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) IL-10 | sc-421076-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen Il10 del ratón codifica la interleucina-10 (IL-10), una citocina inmunorreguladora producida por múltiples subpoblaciones de leucocitos que restringe los programas inflamatorios innatos y adaptativos. La IL-10 señala a través del complejo del receptor de IL-10 para activar respuestas transcripcionales de STAT3 dependientes de JAK1/TYK2, atenuando la producción de citocinas impulsada por NF-κB, la presentación de antígenos y las vías coestimuladoras. Este eje modula la polarización de macrófagos y células dendríticas, limita la actividad efectora Th1/Th17 y favorece la homeostasis tisular en las barreras mucosas. La señalización desregulada de IL-10 se asocia con respuestas inflamatorias aberrantes y con una susceptibilidad alterada a la patología mediada por el sistema inmunitario, lo que convierte a Il10 en un nodo clave para estudiar el control por retroalimentación de citocinas en modelos relevantes para la enfermedad.
IL-10 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Il10 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Il10. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Il10. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Il10 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.