Ikaros Lentiviral Activation Particles (m): sc-423820-LAC

Das murine Ikzf1-Gen kodiert den Zinkfinger-Transkriptionsfaktor Ikaros, einen zentralen Regulator der Festlegung hämatopoetischer Zelllinien und der Lymphozytendifferenzierung. Ikaros bindet an regulatorische DNA-Elemente, um Chromatin-Remodeling und Transkriptionsprogramme zu koordinieren, die die Entwicklung von B- und T-Zellen, die Immuntoleranz sowie die zytokinresponsive Genexpression prägen. Aufgrund seiner Funktionen bei der Kontrolle der Zellzyklusprogression, V(D)J-Rekombinations-assoziierter Programme und des epigenetischen Zustands wird Ikzf1 intensiv im Kontext von Leukämogenese-Mechanismen und immunologischer Dysregulation untersucht. Störungen Ikaros-abhängiger Netzwerke stehen in Zusammenhang mit veränderter lymphoider Reifung und aberranten transkriptionellen Schaltkreisen, die für Modelle hämatologischer Erkrankungen relevant sind.

Ikaros Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Ikzf1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Ikaros Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Ikzf1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Ikaros-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Ikzf1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.