Plásmido Doble Nickase (m) IGF-1 Receptor α/β/IGF1R: sc-421057-NIC

Igf1r codifica el receptor del factor de crecimiento similar a la insulina 1 (IGF-1R), una tirosina cinasa receptora sintetizada como un heterotetrámero α/β que se une a IGF-1 e IGF-2 para iniciar señales mitogénicas y de promoción de la supervivencia. Tras la unión del ligando y la autofosforilación, IGF-1R activa las vías PI3K–AKT–mTOR y RAS–RAF–MEK–ERK, coordinando el metabolismo de la glucosa, la síntesis proteica, la progresión del ciclo celular y la resistencia a la apoptosis. En biología del ratón, Igf1r es central para el crecimiento embrionario y posnatal, la regeneración tisular y el mantenimiento de células madre/progenitoras, con una intensa intercomunicación con la señalización del receptor de insulina y control por retroalimentación a través de proteínas IRS. La señalización desregulada de IGF-1R se utiliza ampliamente como eje modelo en estudios de transformación oncogénica, fenotipos asociados a metástasis y trastornos metabólicos o del desarrollo, donde la reconfiguración de las vías puede investigarse en antecedentes genéticos definidos.

IGF-1 Receptor α/β/IGF1R El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Igf1r en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Igf1r. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Igf1r. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Igf1r alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.