IFN-γRα Double Nickase Plasmid (h): sc-401191-NIC

IFNGR1 kodiert die Interferon‑Gamma‑Rezeptor‑Alpha‑Kette (IFN‑γRα), die ligandenbindende Untereinheit des IFN‑γ‑Rezeptorkomplexes, der als Antwort auf IFN‑γ antimikrobielle und immunmodulatorische Signalwege initiiert. Nach Bindung an den Rezeptor phosphorylieren die assoziierten Kinasen JAK1/JAK2 STAT1 und stoßen so Transkriptionsprogramme an, die die Antigenpräsentation, die Aktivierung von Makrophagen und die Regulation von Th1‑Typ‑Immunantworten steuern. Diese Achse überschneidet sich mit der angeborenen Immunerkennung und entzündlichen Netzwerken und beeinflusst die Expression interferonstimulierter Gene sowie von Rückkopplungsregulatoren wie SOCS‑Proteinen. Eine Fehlregulation oder der Verlust der IFNGR1‑Funktion ist mit einer verminderten IFN‑γ‑Antwort und veränderten Wirtsabwehr‑Phänotypen verbunden, was IFNGR1 zu einem wichtigen Ziel für die Untersuchung von Defekten der Immun-Signalübertragung und Mechanismen entzündlicher Erkrankungen in menschlichen Zellen macht.

IFN-γRα Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IFNGR1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IFNGR1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IFNGR1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IFNGR1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.