IFITM5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407248

Übersicht

IFITM5 (interferoninduziertes Transmembranprotein 5, auch als BRIL bekannt) ist ein auf das Knochengewebe beschränktes Membranprotein, das in Osteoblasten und Osteozyten angereichert ist und zur Skelettentwicklung sowie zur Mineralisierung beiträgt. Es ist an Programmen der Osteoblastendifferenzierung beteiligt und beeinflusst die Ablagerung der extrazellulären Matrix sowie die Bildung von Hydroxylapatit, wodurch es membranassoziierte Signalwege mit der Reifung der Knochenmatrix verknüpft. Genetische Veränderungen in IFITM5 sind mit Osteogenesis imperfecta Typ V und Phänotypen eines abnormen Knochenumbaus assoziiert, was IFITM5 für die Untersuchung von Genotyp-Phänotyp-Beziehungen bei erblichen Skeletterkrankungen relevant macht. IFITM5 ist daher ein nützlicher molekularer Ansatzpunkt, um Signalwege zu untersuchen, die die Osteoblastenfunktion, die Matrixorganisation und die Homöostase des Knochengewebes steuern.

Das IFITM5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des IFITM5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des IFITM5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von IFITM5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IFITM5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von IFITM5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IFITM5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf IFITM5-Exone abzielen, die für die IFITM5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere IFITM5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IFITM5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom IFITM5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des IFITM5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IFITM5 HDR-Plasmid (h) und IFITM5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von IFITM5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten IFITM5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.