IFITM3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403281-ACT

インターフェロン誘導性膜貫通タンパク質3（IFITM3）は、インターフェロン刺激遺伝子産物の一つであり、主としてエンドソームおよびリソソーム膜に局在して、幅広いエンベロープウイルスの侵入を制限する。IFITM3は膜の性質や細胞内輸送を変化させることで、I型およびIII型インターフェロン経路を含む自然免疫シグナル伝達の下流におけるエンドサイトーシスによる取り込みや膜融合イベントを調節する。IFITM3の発現量や機能の変動は、ウイルス性呼吸器感染症に対する感受性や重症度の差と関連づけられており、インターフェロン応答と宿主細胞への侵入制御を結び付ける要所として頻繁に研究されている。さらにIFITM3は、膜動態や小胞輸送を再編する炎症シグナルや細胞ストレス応答の文脈でも検討されている。

IFITM3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IFITM3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IFITM3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IFITM3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIFITM3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IFITM3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIFITM3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIFITM3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIFITM3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIFITM3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。