HXK II Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-420866-LAC

O gene Hk2 de camundongo codifica a hexoquinase II (HXK II), uma enzima associada às mitocôndrias que catalisa a primeira etapa comprometida da glicólise ao fosforilar a glicose em glicose-6-fosfato, conectando assim a captação de glicose ao fluxo glicolítico e a vias biossintéticas a jusante. A HXK II integra a sinalização metabólica com a sobrevivência celular ao se acoplar à membrana externa mitocondrial e influenciar o uso de ATP, o equilíbrio redox e a suscetibilidade à apoptose. A atividade de Hk2 interage com a sinalização de insulina/PI3K–AKT, com respostas à hipóxia e com redes de detecção de nutrientes que coordenam a glicólise, a via das pentoses fosfato e aportes anapleróticos ao ciclo do TCA. A expressão ou a localização desregulada da HXK II é frequentemente estudada em modelos de reprogramação metabólica, inflamação e fenótipos glicolíticos associados a tumores, reforçando sua relevância em pesquisas mecanísticas voltadas a doenças.

As Partículas de Ativação Lentivirais HXK II (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Hk2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais HXK II (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Hk2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de HXK II. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Hk2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.