HXK II Lentiviral Activation Particles (m): sc-420866-LAC

Mouse Hk2 kodiert die Hexokinase II (HXK II), ein mitochondrienassoziiertes Enzym, das den ersten verpflichtenden Schritt der Glykolyse katalysiert, indem es Glukose zu Glukose-6-phosphat phosphoryliert. Dadurch koppelt es die Glukoseaufnahme an den glykolytischen Fluss und nachgeschaltete biosynthetische Stoffwechselwege. HXK II verknüpft metabolische Signalgebung mit dem Zellüberleben, indem es an die äußere Mitochondrienmembran bindet und die ATP-Nutzung, das Redoxgleichgewicht sowie die Anfälligkeit für Apoptose beeinflusst. Die Hk2-Aktivität überschneidet sich mit Insulin-/PI3K–AKT-Signalen, Hypoxieantworten und nährstoffsensitiven Netzwerken, die Glykolyse, den Pentosephosphatweg und anaplerotische Zuflüsse in den Citratzyklus koordinieren. Eine fehlregulierte Expression oder Lokalisation von HXK II wird häufig in Modellen der metabolischen Umprogrammierung, Entzündung und tumorassoziierter glykolytischer Phänotypen untersucht und unterstreicht damit ihre Relevanz für krankheitsorientierte mechanistische Forschung.

HXK II Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Hk2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

HXK II Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Hk2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen HXK II-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Hk2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.