Plasmide CRISPR/Cas9 KO HXK I (h): sc-401753

Présentation

Le gène humain HK1 code l’hexokinase I (HXK I), une enzyme associée aux mitochondries qui catalyse la phosphorylation du glucose en glucose-6-phosphate dépendante de l’ATP, engageant ainsi le glucose dans la glycolyse et les voies biosynthétiques connexes. En contrôlant la première étape limitante de l’utilisation du glucose, HXK I influence l’équilibre énergétique cellulaire, l’homéostasie redox via le couplage à la voie des pentoses phosphates, ainsi que le flux de métabolites vers la synthèse du glycogène et des nucléotides. L’activité de HK1 est étroitement intégrée à la fonction mitochondriale et à la signalisation associée à l’apoptose par des interactions au niveau de la membrane mitochondriale externe. Des altérations de l’expression ou de la régulation de HK1 ont été associées à une dérégulation du métabolisme du glucose dans le cancer ainsi qu’à des phénotypes neurodéveloppementaux et hémolytiques, ce qui souligne sa pertinence pour la recherche en biologie métabolique et mitochondriale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HXK I (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HK1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HK1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HXK I.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HK1 pour l'étude de la signalisation de HXK I, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HK1 essentiels à la fonction de HXK I
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HK1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HXK I plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HXK I plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HK1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HXK I plasmide HDR (h) et le HXK I (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HK1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HK1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.