Plásmido Doble Nickase (h) HuD: sc-400132-NIC

ELAVL4 codifica HuD, una proteína de unión a ARN enriquecida en neuronas de la familia ELAV/Hu que reconoce elementos ricos en AU para regular la estabilidad del ARNm, el empalme alternativo y la traducción. HuD coordina programas de control génico postranscripcional que sustentan la diferenciación neuronal, el crecimiento axonal, la plasticidad sináptica y la remodelación dependiente de la actividad, integrándose con la dinámica de los gránulos de estrés y el transporte de ARN en las neuritas. La desregulación de la función y la expresión de ELAVL4/HuD se ha vinculado con alteraciones de la maduración neuronal y del metabolismo del ARN en contextos del neurodesarrollo y la neurodegeneración, y ELAVL4 también se utiliza como marcador de linaje neuronal en biología de tumores cerebrales y en síndromes neurológicos paraneoplásicos. Estas características hacen de ELAVL4 un nodo útil para estudiar regulones de ARN neuronales, la selección de isoformas de transcritos y la reorganización de redes proteína–ARN.

HuD El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ELAVL4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ELAVL4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ELAVL4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ELAVL4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.