HspBP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406487

Übersicht

HSPBP1 kodiert HspBP1, einen Nukleotidaustauschfaktor und Co‑Chaperon, der den HSP70/HSC70‑Chaperonzyklus reguliert, indem er den ATP/ADP‑Austausch und die Freisetzung von Klientenproteinen moduliert. Über seine Interaktionen mit molekularen Chaperonen trägt HspBP1 zur Proteostase, zur Signalübertragung in Stressantworten und zur Qualitätskontrolle fehlgefalteter oder beschädigter Proteine bei, die sich andernfalls anreichern und die zelluläre Homöostase stören könnten. Eine Dysregulation von Chaperonnetzwerken, einschließlich des Gleichgewichts von HSP70‑Kofaktoren, wird häufig mit verändertem Proteinumsatz und veränderter Stresstoleranz in Kontexten wie Neurodegeneration und Krebsbiologie in Verbindung gebracht, wodurch HSPBP1 einen nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien darstellt. In menschlichen Zellen kann eine Störung von HspBP1 dazu beitragen, zu klären, wie chaperonunterstützte Faltung mit Proteinabbauwegen und stressadaptiver Umgestaltung zusammenwirkt.

Das HspBP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HSPBP1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HSPBP1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HSPBP1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HspBP1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HSPBP1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HspBP1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HSPBP1-Exone abzielen, die für die HspBP1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HSPBP1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HspBP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HspBP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HSPBP1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HspBP1 HDR-Plasmid (h) und HspBP1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HSPBP1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HSPBP1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.