HSPA1L CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400479-ACT

HSPA1L kodiert ein Mitglied der HSP70-Familie ATP-abhängiger molekularer Chaperone, das die Proteostase unterstützt, indem es die Faltung neu synthetisierter Proteine fördert, Aggregation verhindert und die Wiederfaltung von durch Stress denaturierten Substraten erleichtert. HSPA1L ist an der zellulären Hitzeschockantwort beteiligt und interagiert mit Co-Chaperon-Netzwerken, um die Proteinkontrolle zu regulieren – einschließlich der Stabilisierung von Signalproteinen und der Modulation stressadaptiver Transkriptionsprogramme. Über diese Funktionen kann HSPA1L Signalwege beeinflussen, die mit endoplasmatischem-Retikulum-Stress, proteasomenvermitteltem Abbau und Entscheidungen über das Zellüberleben während proteotoxischem Stress verknüpft sind. Veränderte Chaperon-Aktivität und Hitzeschock-Signalgebung werden mit krankheitsrelevanten Phänotypen in der Krebsbiologie, bei Neurodegeneration und in Kontexten entzündlichen Stresses in Verbindung gebracht, was HSPA1L zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zur Stressresilienz und zur Aufrechterhaltung des Proteoms macht.

HSPA1L Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HSPA1L-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HSPA1L Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HSPA1L-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HSPA1L-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HSPA1L-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HSPA1L-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HSPA1L-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HSPA1L-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HSPA1L-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.