HSP 56 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403455-ACT

FKBP4 kodiert das Immunophilin FKBP52 (HSP56), eine Peptidyl-Prolyl-cis-trans-Isomerase und einen HSP90-Ko-Chaperon, der das Falten, die Reifung und den Transport von Client-Proteinen reguliert. HSP56 wirkt in multiproteinären Chaperon-Komplexen, die die Signalübertragung von Steroidhormonrezeptoren modulieren, darunter die Signalwege des Glukokortikoid-, Androgen- und Progesteronrezeptors, und beeinflusst dabei Rezeptorstabilität, nukleäre Translokation und Transkriptionsleistung. Über seine TPR-vermittelten Interaktionen mit HSP90 und Ko-Chaperonen verknüpft FKBP4 stressresponsive Proteostase mit Signaltransduktionsprogrammen, die Zellwachstum und Differenzierung prägen. Fehlregulierte Chaperon-/Ko-Chaperon-Netzwerke unter Beteiligung von FKBP4 wurden mit veränderter endokriner Signalgebung und Phänotypen der Proteinhomöostase in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie und die Neurodegenerationsforschung relevant sind.

HSP 56 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FKBP4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HSP 56 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FKBP4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FKBP4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HSP 56-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FKBP4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HSP 56-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HSP 56-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FKBP4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.